ELISA란?
ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay)는 샘플 안의 항원을 정량적으로 검출하는 데 사용되는 방법입니다. 항원은 독감 바이러스 또는 환경 오염물질 등 척추동물의 면역계가 방어 반응을 할 수 있도록 하는 독소 또는 기타 이물질입니다. 잠재적 항원이 될 수 있는 물질의 방대한 범위로 인해 ELISA는 광범위한 여러 샘플 유형에서 항원을 검출 및 정량화하는 검사와 여러 연구 분야에서 사용됩니다. ELISA를 이용하여 세포 용해물, 혈액 샘플, 식품 품목 등을 특정한 대상 물질에 대해 분석할 수 있습니다.
다음과 같은 네 가지 주요 유형의 ELISA가 있습니다. 직접 ELISA, 간접 ELISA, 경쟁적 ELISA, 샌드위치 ELISA. 각 유형은 분석물과 항체가 어떻게 결합 및 사용되는지 보여주는 도표와 함께 아래에 설명되어 있습니다.
샌드위치 ELISA assay 실행 단계
대부분의 샌드위치 ELISA는 마이크로플레이트에서 시행됩니다. 플레이트 웰의 바닥은 항체와 다른 시약이 결합할 수 있는 단단한 표면 역할을 합니다. Microplate washer는 비특이적 물질을 Well에서 세척하는데 사용되며, 흡광 ELISA Microplate Reader는 표적 항원이 존재하는 경우에 발생하는 색 변화를 감지합니다. 플레이트 리더기 소프트웨어는 표준 곡선을 생성하고 결과를 계산하는 데 사용됩니다.
아래 그림은 샌드위치 ELISA Assay의 일반적인 실험과정을 보여줍니다.
1단계: ELISA 플레이트 웰에 포획 항체가 결합합니다.
단계 2: 웰에 샘플 첨가 – 샘플 내 항원이 포획 항체와 결합합니다.
단계 3: 마이크로플레이트 세척 - 결합되지 않은 물질은 씻겨져 나가고, 대상 항원만 남게 됩니다.
단계 4: 검출 항체 첨가 – 효소 접합 검출 항체가 대상 항원의 두 번째 부위에 결합합니다.
단계 5: 마이크로플레이트 세척 - 결합되지 않은 항체는 씻겨져 나가고, 대상 항원에 특이적인 항체만 남게 됩니다.
단계 6: 기질 첨가 – 기질이 검출 항체의 효소에 의해 변환되어 색 변화를 생성합니다.
단계 7: 플레이트 판독 – Microplate Reader가 색 반응과 광학 밀도(OD) 값을 감지합니다.
단계 8: 결과 계산 – 각 샘플에서 항원의 양을 계산하고 분석합니다.
ELISA는 세팅하기 쉽지만 assay 절차에 시간이 많이 걸리고 노동 집약적입니다. High-Throughput 플레이이트 기반 Assay 실험과정을 위한 실험실 자동화는 워크아웃 시간 제공하며 Assay 절차의 샘플 처리량의 증가, 효과성, 효율성 그리고 재현성을 높이는 데 도움이 될 수 있습니다.
ELISA assay와 응용
ELISA는 여러 연구실과 바이오텍 실험실에서 흔히 사용하는 분석기법입니다. 아래에는 중요한 ELISA assay 및 그 응용분야와 관련된 Application Note, 연구, 기술을 모았습니다.
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일반적인 샌드위치 ELISA 프로토콜의 워크플로는 여러 단계의 시약 추가, 배양, 세척으로 구성됩니다. 여기에서는 Microplate washer, 흡광 ELISA Plate Reader 및 소프트웨어를 포함하여 ELISA assay 분석을 수행하는 데 필요한 각 단계, 분석기기 및 도구에 대해 중점적으로 살펴보았습니다.