세포사멸은 배아 발생 및 정상적인 조직 유지 등의 다양한 생물학적 프로세스에 중요한 프로그램된 세포의 사멸 과정입니다. 세포사멸 조절 장애는 암 등 다양한 질병과 관련되어 왔습니다. 생화학적 사건은 세포의 Morphology에 세포 수축(Cell Shrinkage), 핵분단(Nuclear Fragmentation), 염색질응축(Chromatin Condensation) 및 mRNA 감쇠, 최종적으로는 세포의 사멸과 같은 특징 변화를 일으킵니다. 세포사멸은 내재적(Intrinsic) 또는 외부적(Extrinsic) 경로를 통해 시작될 수 있으며, 두 가지 경로 모두 Caspase를 활성화하여 세포의 사멸을 유도합니다.

세포사멸을 분석하는 한 가지 방법은 Caspase-3 및 Caspase-7을 검출하는 것으로서, 두 가지 모두 세포사멸 실행 과정 중에 활성화됩니다. 예를 들어, EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488 Assay 키트는 온전한 세포 내에서 caspase-3/7 작용을 검출할 수 있는 기질을 제공합니다. 기질은 caspase-3/7 DEVD 인식 서열에 연결된 형광 DNA 염료로 구성됩니다. 초기에는 비형광이었던 기질은 형질막을 투과하고 세포질에 들어갑니다. 사멸세포에서, caspase-3/7이 기질을 쪼개고, 세포의 핵으로 이동하여 DNA와 결합하는 고친화력 DNA 염료를 방출합니다. 500nm에서 이루어지는 Excitation으로 인해 530nm에서 밝은 녹색 형광이 방출되고 caspase 활성화의 수준을 평가하는 데 사용될 수 있습니다. 그러면 사멸세포(apoptotic cell)는 자동화 이미징을 사용하여 시각화 및 정량화할 수 있습니다.

HeLa 세포는 화합물 스타우로스포린으로 처리되고 EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay 키트로 염색(녹색)되었습니다. 오버레이 마스크(우측)에서는 녹색으로 식별된 사멸세포와 적색의 비사멸세포를 보여 줍니다.

사멸세포 이미지의 분석은 ImageXpress Pico Automated Cell Imaging System에서 수행될 수 있는데, 이것은 편리한 이미지 획득 및 분석을 위해 내장된 '세포사멸' 프로토콜 템플릿을 제공합니다. Dead Cell과 Live Cell의 수 및 비율과 같은 유용한 결과물이 자동으로 계산될 수 있습니다. 다음은 세포사멸 Assay 플레이트를 Imaging하고 분석하기 위한 일반적인 실험과정입니다.

사멸세포(apoptotic cell)의 이미징 및 분석을 위한 일반적인 실험과정입니다.

ImageXpress Pico 시스템을 세포사멸 assay에 사용하는 것의 장점 요약:

• 세포 건강 상태의 직접적인 시각화 및 모니터링 가능
• 세포에 대한 객관적인 평가를 지원하여 재현 가능한 결과 도출
• 사멸세포의 수와 % 등의 가치 있는 결과물을 자동으로 확인

자세한 내용은 당사의 Application Note '자동화 Cell Imaging을 사용하는 세포사멸의 분석' 다운로드 >>

ImageXpress Pico 시스템 페이지로 돌아가기 >>