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리즈 대학, ImageXpress Pico를 이용하여 단백질 기능 조사

리즈 대학

Darren Tomlinson

Heather Martin

ImageXpress Pico 자동화 세포 이미징 시스템

도전

영국 리즈 대학의 분자 및 세포 생물학 교실, Tomlinson 실험실은 분자 수준에서 단백질 기능을 조사합니다. Darren Tomlinson의 연구그룹은 단백질 기능을 연구하기 위해 Affimer라는 새로운 분자 인식 도구의 사용에 관심이 있습니다. Affimer(Adhiron이라고도 알려짐)는 분자 인식을 위한 두 개의 무작위 루프로 구성된 스캐폴드 단백질입니다. 진단 등의 응용 분야에서 항체에 대한 대체 시약으로서 사용될 수 있으며, 단백질 기능과 연관된 핵심 영역을 식별하기 위한 표적 단백질의 표면을 프로브하는 데 사용될 수 있습니다. 이 실험실은 여러 유형의 분자에 대한 스크리닝 서비스를 제공하나, Affimer 스캐폴드를 사용하여 분자 수준에서 단백질 기능을 이해하는 것에 중점을 둡니다.

이 Affimer를 연구하기 위해, 연구그룹에는 작은 규모의 스크리닝을 실행할 수 있는 사용이 쉬운 시스템이 필요했습니다.

ImageXpress Pico를 이용하여 단백질 기능 조사

솔루션

연구그룹은 다른 high-content imaging 시스템의 대안으로 저렴하고 사용자 친화적인 ImageXpress Pico를 선택하였습니다.

결과

연구그룹은 소규모 스크리닝에는 ImageXpress Pico를 주로 사용하여 다양한 세포 내 단백질을 표적으로 하는 Affimer 단백질이 표적 단백질의 다운스트림 신호전달 경로에 미치는 영향을 살펴봅니다. 한 예시로서, 그림 1은 인산화 ERK로 염색(오렌지색)된 마우스 배아 섬유아세포를 GFP 태그 Affimer(녹색)로 transfection한 상태를 보여줍니다. 이는 Affimer를 표적으로 하는 단백질이 EGF 자극 pERK 발현을 감소시킴을 입증합니다.

또한 온도 제어 기능이 특히 유용한 시간 경과 실험에 ImageXpress Pico를 사용합니다.

2~3개의 형광단/플레이트를 사용하므로 현재 assay에 따라 하루 약 3~4개 플레이트를 이미징하고 있습니다.

“비전문가들이 쉽게 사용할 수 있는 CRX 소프트웨어의 사용자 친화적인 인터페이스가 마음에 듭니다.”

 

GFP를 transfection 한 마우스 배아 섬유아세포

그림 1: 인산화 ERK(오렌지색)로 염색된 마우스 배아 섬유아세포에 GFP 태그 Affimer(녹색)를 transfection. 화살표는 pERK 염색의 감소가 명확하게 관찰되는 Affimer 발현 세포를 강조합니다. 이미지는 20배율에서 ImageXpress Pico로 획득하였습니다.

Tomlinson 실험실에 대해 더 자세히 알아보십시오.