Jurkat 세포는 TCell Lymphocyte 백혈병에 걸린 남자 아이의 말초혈액으로부터 유래하였으며, 1970년대 후반에 확립된 immortalize T림프구 세포주입니다. 이 세포주는 T-cell leukemia, T-cell signaling, 그리고 Cancer Cell 의 약물 민감도에 대한 연구를 위해 사용되어왔습니다. 작고 둥근 세포로 Suspension 에서 쉽게 생장하며, 여기에 제시된 것처럼 다양한 cell viability와 세포사멸 assay의 모델 시스템으로도 사용되었습니다.
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그림 1: StainFree 세포 계수
SpectraMax Minimax 300 Imaging Cytometer 를 사용하여 Jurkat Cell 을 이미징하였으며, 기본 설정 ‘CellsB’를 이용하여 Transmitted Light 에서 촬영한 이미지 상에서 세포를 식별하였습니다. 좌측에 보이는 것은 Transmitted Light 에서 촬영한 원본 이미지이며, 우측은 같은 이미지를 소프트웨어로 식별하여 세포를 보라색 마스크로 나타낸 것입니다. 두 세포에 대한 밀도는 다음과 같습니다: 50,000 and 1562 cells seeded per well of a 96-well plate.
그림 2: StainFree 세포 계수 vs. 형광 세포 계수
웰당 390~50,000개의 세포 밀도로 Jurkat 세포를 Seeding 한 뒤 StainFree 기술(청색 점)을 이용하여 계수하거나 EarlyTox™ Live Cell Assay 시약을 사용하여 염색한 뒤 녹색 형광 세포를 계수하였습니다(녹색 점). 두 가지 방법으로 얻은 세포 수를 비교했을때 Cell Density의 높은 일치도를 보입니다. 세포 계수는 웰당 4개 부분을 이미징하여 측정하였습니다.
그림 3: EarlyTox™ Live/Dead Assay
Jurkat 세포는 Staurosporine (적색 그래프), Camptothecin (녹색 그래프), Etoposid (청색 그래프)로 Serial Dilution 하여 24시간 동안 처리한 뒤, Molecular Devices의 EarlyTox Live/Dead Assay 키트를 이용해 assay를 수행하였습니다 . Live Cell 은 Calcein AM(Green)로, 죽은 세포는 ethidium homodimer(Red)로 염색하였으며, SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader 의 Well Scan 기능을 이용하여 Well 을 규칙적으로 가로질러 Multiple Read 를 진행했습니다. 결과는 녹색/적색 비율과 처리된 약물의 농도를 비교하여 그래프로 나타냈습니다. 이 실험에 사용된 모든 약물 24시간 내에 cell viability를 크게 감소시켰습니다.
그림 4: EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay
Jurkat 세포는 Staurosporine (적색 그래프), Camptothecin (녹색 그래프), Etoposid (청색 그래프)로 28시간 동안 처리한 뒤, EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 Assay 키트를 이용해 Apoptosis 에 대한 분석을 시행했습니다. Caspase-3/7이 발현된 세포는 녹색 형광으로 염색하였으며, SpectraMax MiniMax 300 Imaging cytometer 를 이용하여 이미징하고 계수했습니다.
Tip:
Jurkat 세포는 동그란 모양으로 균일한 형태를 보이기 때문에 이미지를 통해서 쉽게 계수할 수 있습니다. StainFree Cell Counting 에는, SoftMax Pro 소프트웨어에서 기본 설정인 'CellsC'를 이용할 수 있습니다.
Jurkat 세포 분석을 위한 장비와 시약
- SpectraMax® i3x 다중모드 마이크로플레이트 검출 플랫폼
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro 소프트웨어
| Parameter | 세포 계수를 위한 설정 |
| Optical configuration | SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer |
| Read mode | Imaging |
| Read type | Endpoint |
| Wavelength settings | Transmitted light |
| Image acquisition settings | Exposure: 7ms |
| Image analysis settings | Analysis type: Discrete Object Analysis Wavelength for finding objects: TL |
| Find objects | Settings: 'CellsC' predefined setting |
StainFree 염색 없는 Cell Detection 기술에 관하여
Imaging 을 기반으로 한 Cell-Based Assay 는 일반적으로 형광물질을 세포에 붙여야 하는데, 이는 살아있는 세포에 독성이 될수도 있고, 혹은 고정된 세포를 사용하여 염색을 해야하기도 합니다. Cell Counting, Cell Confluence 를 분석하는 경우, StainFree 기법을 이용하면, Cell Viability 에 영향을 주지 않고 Cell Growth 와 Cell Viability 를 정량적으로 Monitoring 할 수 있습니다.
MiniMax 300 Imaging Cytometer 가 장착된 SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate 플랫폼에서 특허 출원 중인 유일무이한 기술, StainFree Cell Detection 기술을 이용할 수 있습니다. DNA에 삽입되는 DAPI나 장기적으로 세포에 독성이 되기도 하는 Live Cell Dye 등으로 세포를 염색하지 않고, Cell Growth, Cell Viability 와 같은 다양한 분석을 수행할 수 있게 합니다.