Western Blot
Western blotting이란?
Western blot은 단백질 검출과 정량화에 많이 사용되는 기법입니다. 이는 세포 용해물과 같은 단백질의 복합적 혼합물로부터 대상이 되는 특정 단백질을 분리하고 식별할 수 있도록 합니다. 진단, 생명공학, 분자생물학, 단백질체학 등의 응용 분야에서 세포에 발현된 단백질 수치를 비롯하여 크기 및 다른 특성의 변화를 평가하기 위해 western blot이 널리 사용되고 있습니다.
Western Blot 방법
사용한 이차 항체에 따라 표적 단백질의 검출에 비색, 화학발광, 또는 형광 중 어느 것을 사용할 지 고려해야 하는 여러 western blot 방법이 있습니다. 이 방법들은 아래에 설명되어 있으며 검출을 위해 각기 다른 장비가 필요합니다. 예를 들어, 화학발광은 X선 필름 또는 디지털 이미징 장비로 검출할 수 있는 반면, 형광 이차 항체의 검출에는 형광 이미저가 필요합니다. 각 검출법은 장점과 단점을 가지므로, 방법을 선택할 때 이를 고려할 필요가 있습니다.
소개할 다른 방법은 ScanLater™ Western Blot Detection 시스템으로, Multi-Mode Microplate Reader 플랫폼에서 동급 최고의 Western Blot Detection을 가능하게 합니다. 연구원들은 기질이 필요하지 않은 이 assay를 사용하여 기존의 화학발광 assay와 동등한 감도를 달성하는 동시에, 단일 리더기에 western blot, ELISA, 다른 응용 분야를 통합할 수 있습니다. 아래의 주요 Application Note에서 더 자세한 내용을 다룹니다.
Western blotting assay 워크플로
다음은 일반적인 western blot assay의 사용 단계입니다.
1. 전기영동 수행 – 먼저 젤 전기영동을 사용하여 단백질을 크기별로 분리합니다.
2. 전달 – 이후 이들 단백질을 Blotting 멤브레인으로 전달합니다. 이 멤브레인은 보통 니트로셀룰로오스나 PVDF로 만들며, 대상 단백질에 특이적인 일차 항체를 프로브로 사용합니다.
3. 차단 버퍼로 차단 – 이는 일차 항체(다음 단계)가 멤브레인 자체에 결합하는 것을 방지합니다.
4. 일차 항체 배양 – 일차 항체가 표적 단백질에 결합합니다.
5. 세척 버퍼로 세척 – 미결합 일차 항체를 씻어냅니다.
6. 이차 항체 배양 – 일차 항체를 인식하고 결합하는 이차 항체를 첨가합니다. 이 이차 항체는 Blot에 밴드로 나타나는 관심 단백질을 검출할 수 있는 효소 또는 기타 물질에 결합됩니다.
7. 세척 버퍼로 세척 – 미결합 이차 항체를 씻어냅니다.
8. 선택한 방법/화학을 이용한 검출 – 표적 단백질은 사용한 이차 항체에 따라 비색, 형광, 발광법을 이용해 검출할 수 있습니다.