형광(Fluorescence)
형광이란?
형광은 더 긴 파장에서 광선의 일시적인 방출(Em) 후 특정 파장(여기: Ex)에서 광선을 흡수하는 일부 원자와 분자의 속성입니다(그림 2). Excitation 및 Emission 피크 간 거리는 스토크스 이동이라고 하며, 형광단에 의존적입니다(그림 1).
형광은 특정 파장에서 샘플을 들뜨게 하는 외부 광원과 연관됩니다. 적절한 파장이 분자에 가해지면, 분자가 기저상태에서 들뜬 상태로 변환됩니다. 분자가 기저상태로 돌아오면, 더 낮은 에너지의 서로 다른 더 긴 파장에서 빛과 열(에너지 손실) 형태로 방출됩니다(그림 3).
그림 1
그림 2
그림 3
형광 검출 작업은 어떻게 이루어집니까?
형광의 세기(Fi) 검출을 이용하는 Microplate Reader는 광원을 사용합니다. 이는 보통 제논 플래시 램프나 LED로 형광단(형광 분자)을 특정 파장에서 들뜨게 합니다. 샘플을 들뜨게 하는 데 필요한 파장은 특정 파장의 필터나 필요한 파장에 맞추어 조절된 단색기를 이용해 선택할 수 있습니다.
이후, 형광단이 이차 필터나 단색기로 선택한 다른 파장의 광선을 방출합니다. 이 방출된 형광은 PMT(photomultiplier tube)에 의해 검출되며, 샘플의 형광의 세기가 상대적 형광 단위로 표시됩니다.