AAV 플라스미드, 아데노 연관 바이러스

AAV 플라스미드

AAV 플라스미드란?

생물제조 분야에서 널리 사용되고 있는 미세 바이러스인 AAV(아데노 연관 바이러스)는 제한된 복제와 감소된 인간 면역원성으로 인해 선호됩니다. 유전자 전달을 위한 고성능 바이러스 벡터를 생산하려면 플라스미드 DNA 제조 및 기타 복잡한 단계가 포함된 복잡한 생물제조 프로세스가 필요합니다.

AAV 플라스미드 생산 실험과정

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세포 배양: AAV DNA 벡터 구성과 플라스미드 확장. 재조합 AAV 입자를 생성하는 데 필요한 모든 요소를 인코딩하는 플라스미드의 준비 및 증폭.
배양 조건 적응: 프로세스 요건에 따라 3D 또는 2D 형식을 포함한 현탁 또는 부착 배양 시스템을 최적화합니다.
AAV 벡터 생산: AAV 벡터 DNA를 일시적으로 세포에 도입하거나 복제 및 발현 기간인 2~3일 동안 안정적인 세포주를 확립합니다.
AAV 회수: 세포 배양 배지를 여과하고 원심분리하여 이물질을 제거하고 AAV 벡터를 농축합니다. 추가 정제를 위해 접선유동여과(TFF)를 사용할 수 있습니다. 세포 배양 배지 또는 용해물에서 AAV 입자를 포착하고 회수하는 것은 침전, 원심분리, 크로마토그래피 및 접선유동여과를 포함하여 재조합 단백질에 사용되는 표준 기법을 따릅니다.
AAV 정제: 친화성 또는 이온 교환과 같은 초원심분리 및 크로마토그래피를 사용하여 고순도 AAV 벡터를 준비합니다. 프로세스 전반에 걸쳐 품질 관리를 유지합니다.
AAV 적정: 최고 역가를 확인하기 위한 AAV 벡터 정량 및 정성적 분석은 실시간 PCR을 포함한 표준 기법에 따라 수행될 수 있습니다.
Mammalian Cell 형질도입: 정제된 AAV 입자는 IPSC, 3D 오가노이드 및 CAR-T 세포 치료법을 포함한 표적 Mammalian 세포주의 형질도입에 사용될 수 있습니다.
클론 스크리닝 및 선택: 성공적으로 형질도입된 클론을 식별하려면 클론 스크리닝이 필요합니다. High-Throughput의 자동화 방법에 따라 고가치 클론 선택 및 배양물 농축을 수행할 수 있습니다.
이질성 해소 및 단일 세포 분리: 클론 배양물 이질성은 이미지 기반 분석과 함께 단일 세포 분리 기술을 통해 해결되어 확립된 AAV 형질도입 세포주의 Monoclonality에 대한 증거를 제시합니다.
확장 및 특성 분석: 표적 세포주의 다운스트림 특성 분석은 High-Content Imaging 자동화 솔루션 및 ELISA Assay를 통해 수행할 수 있습니다.

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AAV 플라스미드 생산 실험과정을 최적화하는 혁신적인 솔루션

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