코로나19(COVID-19) 대응 - 팬데믹 기간 중 백신 및 치료제 관련 연구를 위한 지원을 아끼지 않고 있습니다. 자세히 알아보기 

Monoclonality

Monoclonality 문서화 - 치료 세포주의 규제 지표

Monoclonality란?

Monoclonality는 단일 전구세포(단일 세포)에서 유래된 세포주를 설명하는 용어입니다. 따라서 이 세포주는 Monoclonal이 됩니다. Monoclonal Antibody와 같은 생체의약품 분자를 생성하는 과정에서 Cell Line Development(세포주 개발)와 Monoclonality Assurance는 매우 중요합니다. 대상 단백질을 로버스트하게 발현하는 생존 가능한 단일 세포를 분리한 뒤, 세포주를 확립할 수 있습니다. 이 과정의 핵심 마일스톤은 클론형성능의 근거를 문서화하여 세포주의 유전적 재현가능성을 보장하는 것입니다.

Monoclonality의 문서화는 치료 세포주의 규제 지표이며 일반적으로 단일 세포의 이미지를 기록하고 이를 규제 문서 파일에 포함하는 이미지 기반 작업입니다.

Monoclonality 검증 - 콜로니의 기원 보기

Monoclonality 검증—콜로니의 기원 보기. 각 Welll의 생장(이미지) 이력을 추적하여 Monoclonality의 근거를 제공하는 시작점으로 되돌아갈 수 있습니다.

왜 Monoclonality가 중요한가?

Cell Line Development에 대한 규제가 점점 더 엄격해지면서, 연구자들은 단일 세포 클로닝을 수행하고 세포주가 단일 세포에서 유래하였다는 근거(클론형성능의 증거)를 제시해야 합니다. 기존 클로닝 방법(예: 한계희석법과 유세포분석)은 통계적 분석을 사용하여 Monoclonality의 신뢰수준을 결정합니다. 그러나 바이오프로세싱에서의 더 견고한 기술과 방법론이 필요해지면서 Monoclonality의 문서화가 추진되었습니다. 이제 많은 연구자들이 일상적으로 CloneSelect Imager와 같은 Imaging 시스템을 사용하여 Monoclonality를 검증하고 세포 배양 배지에서 세포 생장을 Monitoring합니다.

Cell Line Development와 Monoclonality 보장

특정 대상 단백질을 발현하는 세포주 개발은 생물학적 제제의 생성에 중요하며, 규제 당국은 생물학적 제제를 시판하기 위해 Monoclonality의 근거를 요구합니다. 기존 접근법은 0일 차에 투과된 백색광을 사용하여 Well을 시각화하여 단일 세포의 유무를 확인하는 것과 관련됩니다. 그러나 세포 파편과 Well 아티팩트로 인해 세포로 쉽게 착각할 수 있으므로 이 접근법에 문제가 없는 것은 아닙니다. 결과적으로 Cell Line Developer들은 일반적으로 콜로니 상태에서 세포를 평가하며 콜로니의 기원을 추적하여 Monoclonality를 확인합니다.

이 실험과정은 객관적 이미지 분석에 기반한 Monoclonality 검증을 위해 CloneSelect Imager 시스템 과정을 강조합니다. Single Cell Sorting을 위한 CloneSelect 단일 세포 프린터와 결합되면 실험과정의 Clonal Outgrowth의 증가와 추가적인 이미지 기반 Monoclonality 보증이 모두 개선됩니다.

Monoclonality 실험과정
  1. 단일 세포를 Microplate Well로 분리합니다. – Single Cell로 Viable Cell을 분리하고 Cloning합니다. 이를 통해 사용되는 세포의 Population이 유전적으로 동일하며 Expression이 균일하게 이루어지도록 합니다.

  2. 0일 차부터 플레이트 WL을 스캔합니다. – 0일 차부터 플레이트를 Imaging합니다. Monoclonality를 문서화(치료 세포주의 규제 지표)하는 것은 일반적으로 단일 세포의 이미지를 기록하고 이를 규제 문서 파일에 포함하는 이미지 기반 작업입니다.

  3. 플레이트 스캔을 검토하고 전체 Outgrowth(WL)를 평가합니다. – 세포 Growth Rate, Confluence 측정값, 콜로니 형성을 추적하는 이미지를 검토하고 분석합니다.

  4. Monoclonality를 확인하고 Well 데이터를 규제 문서 제출을 위해 추출합니다. – Monoclonality를 확인하고 Well 데이터를 규제 문서 제출을 위해 상세 보고서에서 추출합니다.

단일 세포 분리기를 이용한 Clonal Outgrowth 개선

CloneSelect 단일 세포 프린터 시리즈는 완전 자동화 시스템으로, 단일 세포를 표준 Microplate에 정렬 및 배치하기 위해 독점 미세 유체공학 기반 기술과 실시간 이미지 분석을 활용하는 동시에 이미지 문서화로 Monoclonality를 보장합니다. 한계희석법과 세포 분리에 기반한 유세포분석의 결점을 해결하기 위해, 이미지에 기반한 클론형성능의 근거, 백색광(c. sight와 f. sight 시스템)이나 선택적 형광(f. sight 시스템 단독) 기반한 빠르고 효율적인 단일 세포의 배치, 우수한 배치 후 세포 성장, 교차오염의 위험 최소화, 극도로 낮은 유지 비용을 제공합니다. CloneSelect Imager와 결합된 CloneSelect 단일 세포 프린터는 실험과정의 Clonal Outgrowth의 증가와 추가적인 이미지 기반 Monoclonality 보증을 모두 개선하는 것으로 나타납니다.

단일 세포 분리기를 이용한 Clonal Outgrowth 개선

CloneSelect 단일 세포 프린터 기술(A) 세포 오염 표본이 Catridge에 놓이면, Catridge가 SCP에 장착되어 Print가 실행될 수 있습니다.
프린팅 절차 도중 예측 가능한 순서에서 Piezo-Driven Actuator에 의해 액적이 지속적으로 생성됩니다. 세포를 포함하지 않았거나 하나 이상의 세포를 포함한 액적은 노즐 바로 밑의 흡입기
메커니즘을 사용하여 빨려나갑니다. 단일 세포 Event가 식별될 때, Shutter 메커니즘이 흡입기를 차단하여 단일 세포가 포함된 액적이 Well에 떨어지도록 합니다. (B) 단일
세포 Event가 검출되면, 5개의 이미지가 촬영되어 노즐에서 클론형성능의 근거로 제시됩니다. 이미지 1-3은 액적 배출 전 세포의 존재를 보여줍니다. 이미지 4는
단일 세포를 포함한 영역을 표지하며, 이미지5는 액적 배출 이후의 노즐을 보여줍니다.

Microplate Imaging, 클론 특성 분석, 보고서 생성 Microplate Imaging, 클론 특성 분석, 보고서 생성

(A) 10일 차에 SCP 프린팅 세션에서 도출된 클론이 Imaging됩니다. 플레이트 Thumbnail 탭은 콜로니를 시각화할 수 있도록 합니다. 개별 Well을 클릭하면 전체 이미지가 나타나는 View Image 탭을 사용자에게 보여줍니다. (B) Loci Count 탭은 한 콜로니의 영역과 밀집성, 진원도 측정을 조절하여 최적화된 콜로니 Counting이 가능하게 합니다. (C) Generate Report 탭에서는 한 시리즈에서 시점별로 세포 영역(Green 박스)을 지정하고 조절하여 단일 세포에서 콜로니로의 생장을 특성 분석할 수 있습니다.

무엇이 Monoclonal이고 무엇이 아닌가

CloneSelect Imager 소프트웨어를 사용하여 개별 고정화 콜로니를 확대하면, 서로 다른 시점의 콜로니 이미지를 검토하여 생장을 추적하고 콜로니가 monoclonal인지 여부를 판단할 수 있습니다. 아래의 그림에는, 두 개의 콜로니의 이미지가 제시됩니다. 두 개의 콜로니의 생장을 관찰하고 0일 차까지 이미지를 추적하면, 콜로니가 하나 이상의 세포에서 유래되었는지 여부를 파악할 수 있습니다. Bead(Yellow 원으로 표시됨)를 반고형 배지에 첨가하면 위치 기준 역할을 하여 동일한 콜로니가 매회 Imaging되었는지 확인할 수 있습니다.

Monoclonal 단세포 콜로니

CloneMedia CHO Growth A 반고형 배지에서의 CHO-s cell growthCloneSelect Imager는 다중 시점에 6 well 플레이트의 이미지를 촬영하기 위해 사용되었습니다. 0일 차에, 위 열에 하나의 세포가 존재한다는 것이 명확하게 관찰되었고, 아래 열에 두 개의 세포가 관찰되었습니다. Yellow 원은 시간에 따라 동일한 콜로니가 Imaging되었는지 확인하기 위한 위치 기준으로 사용되는 Bead의 위치를 보여줍니다.

Monoclonality의 이미지 근거 제시하기(보고서)

Cell line development 과정에서 monoclonality 형성능의 근거를 이미지로 제시하는 것은 단일 세포의 이미지를 추출하는 것처럼 간단하지 않습니다. 예를 들어 전체 Well의 High-Resolution 이미지도 두 번째 세포가 존재하지 않는지 확인하기 위해 조사해야 합니다.

몇 번의 간단한 클릭만으로 CloneSelect™ Imager(CSI)의 Monoclonality 보고서 기능이 클론형성능을 확립하기 위한 근거 이미지를 쉽게 공유할 수 있는 보고서로 객관적으로 구성하며, 동일한 과정을 수동으로 할 때 일반적으로 필요한 연구자들의 시간을 절감해 줍니다.

자세히 알아보기

Monoclonality 검증

Monoclonality 보증 방법

Monoclonality의 검증과 문서화를 위한 서로 다른 방법에 대해 알아보세요.

  • Calcein AM을 사용한 신뢰할 수 있는 클론형성능 보증

    Calcein AM을 사용한 신뢰할 수 있는 클론형성능 보증

    Viability에 대한 최소 효과를 가진 Calcein AM을 이용한 클론형성능의 확실한 보증

    여기에서는 형광 가능 CloneSelect™ Imager와 결합된 형광 시약인 Calcein AM을 사용하여 무표지 조건에 대한 유사한 Viability를 보여주면서도 동시에 높은 클론형성능을 보증해 주는 최적화된 실험과정을 살펴봅니다.

    응용 분야 노트 읽기  

    eBook: 고가치 세포주의 최적화

    고가치 세포주의 최적화

    이 eBook에서는 Cell line development 실험과정 및 공정을 가속화하고 고생산 mammalian cell line 선택을 더 쉽고 빠르게 지원하기 위한 High-throughput 솔루션에 대한 개요를 제공합니다.

    eBook 다운로드  

  • Monoclonal CHO-S 세포를 식별하는 형광법

    Monoclonal CHO-S 세포를 식별하는 형광법

    Cell line development 촉진을 위한 신속한 monoclonality 검증 방법

    백색광 Imaging을 통한 Monoclonality 검증이 가능하지만, 파편, 먼지, 공기방울로 인해 폐기되어야 할 높은 수치의 클론을 유발하는 단일 세포의 식별에 시간이 오래 걸리도록 하며 이를 어렵게 합니다. 여기서는 CellTracker Green CMDFA를 이용하여 Monoclonal CHO-S 세포를 식별하기 위한 형광법을 제시합니다.

    Scientific Poster 다운로드  

    Cell Line Development와 Monoclonality 보장

    Cell Line Development와 Monoclonality 보장

    한계희석법이나 FACS(Fluorescence Activated Cell Sorting)는 일반적으로 단일 세포를 Well에 Seeding할 때 수행됩니다. 이후 현미경을 사용하여 각 Well에 Seeding한 세포 수를 측정하고 세포 성장을 모니터링하는 데 사용합니다. 백색광 Imaging을 통한 Monoclonality 검증이 가능하지만, 파편, 먼지, 공기방울로 인해 폐기되어야 할 높은 수치의 클론을 유발하는 단일 세포의 식별에 시간이 오래 걸리도록 하며 이를 어렵게 합니다.

    Flyer 다운로드  

  • 반고형 배지에 배양한 Monoclonal CHO-S의 식별

    반고형 배지에 배양한 Monoclonal CHO-S의 식별

    반고형 배지에 배양한 단일클론 CHO-S의 확실한 식별

    CloneMedia CHO Growth A에서 CHO 세포를 배양하는 것은 액상 배지에서 한계희석법을 수행하는 것보다 CHO 세포를 클로닝하는 데 더욱 효율적인 방법입니다. 반고형 배지는 세포를 고정하여 일상적 취급 중에 세포가 움직이지 않게 합니다. 이를 통해 연구원들은 자신감 있게 콜로니 안으로의 단일 세포 배양을 추적할 수 있습니다.

    응용 분야 노트 읽기  

    더 높은 클론형성능을 보장하고 클로닝 효율성을 개선합니다.

    더 높은 클론형성능을 보장하고 클로닝 효율성을 개선합니다.

    단일 세포 분리 및 Microplate Imaging과 결합된 실험과정은 더 높은 클론형성능을 보장하고 클로닝 효율성을 개선합니다

    최적화된 실험과정은 시간과 노동을 절감하며, Outgrowth의 효율성을 높여 소모품과 시약의 비용을 줄이면서도 높은 클론형성능을 보장하고 규제 당국에 바로 제출할 수 있는 신속한 문서화가 가능하도록 합니다.

    응용 분야 노트 읽기  

  • Monoclonality 보고하기

    CloneSelect Imager의 Monoclonality 보고 기능

    CloneSelect Imager의 Monoclonality 보고 기능

    몇 번의 간단한 클릭으로 CloneSelect Imager에서 Monoclonality 보고 기능이 클론형성능 확립에 필요한 근거 이미지를 쉽게 공유 가능한 보고서로 객관적으로 구성할 수 있어, 연구자들이 동일한 과정을 수동으로 할 때 일반적으로 필요한 시간을 절감해 줍니다.

    브로슈어 보기  

    Mammalian Cell Line의 Screening과 선택 간소화하기

    Mammalian Cell Line의 Screening과 선택 간소화하기

    ClonePix 시스템을 사용하여 monoclonality를 평가

    ClonePix 시스템은 일반적으로 치료 단백질과 연구 Monoclonal Antibody의 생산에 사용되는 분비 Mammalian Cell Line을 신속하게 Screening하고 분리하는 데 있어 강력한 도구입니다. 튜토리얼에 제시된 데이터는 반고형 배지에서 Mammalian cell의 콜로니 피킹이 클론 세포주를 분리하는 데 효과적인 수단이라는 주장을 뒷받침합니다.

    응용 분야 노트 읽기  

Monoclonality에 대한 자료

동영상 및 웨비나

분자 복제 및 균주 제조 응용 분야 자동화를 위한 조언

Monoclonality 실험과정

Monoclonality 실험과정