Monoclonality
Monoclonality 문서화 - 치료 세포주의 규제 지표
Monoclonality란?
Monoclonality는 단일 전구세포(단일 세포)에서 유래된 세포주를 설명하는 용어입니다. 따라서 이 세포주는 Monoclonal이 됩니다. Monoclonal Antibody와 같은 생체의약품 분자를 생성하는 과정에서 Cell Line Development(세포주 개발)와 Monoclonality Assurance는 매우 중요합니다. 대상 단백질을 로버스트하게 발현하는 생존 가능한 단일 세포를 분리한 뒤, 세포주를 확립할 수 있습니다. 이 과정의 핵심 마일스톤은 클론형성능의 근거를 문서화하여 세포주의 유전적 재현가능성을 보장하는 것입니다.
Monoclonality의 문서화는 치료 세포주의 규제 지표이며 일반적으로 단일 세포의 이미지를 기록하고 이를 규제 문서 파일에 포함하는 이미지 기반 작업입니다.
왜 Monoclonality가 중요한가?
Cell Line Development에 대한 규제가 점점 더 엄격해지면서, 연구자들은 단일 세포 클로닝을 수행하고 세포주가 단일 세포에서 유래하였다는 근거(클론형성능의 증거)를 제시해야 합니다. 기존 클로닝 방법(예: 한계희석법과 유세포분석)은 통계적 분석을 사용하여 Monoclonality의 신뢰수준을 결정합니다. 그러나 바이오프로세싱에서의 더 견고한 기술과 방법론이 필요해지면서 Monoclonality의 문서화가 추진되었습니다. 이제 많은 연구자들이 일상적으로 CloneSelect Imager와 같은 Imaging 시스템을 사용하여 Monoclonality를 검증하고 세포 배양 배지에서 세포 생장을 Monitoring합니다.
Cell Line Development와 Monoclonality 보장
특정 대상 단백질을 발현하는 세포주 개발은 생물학적 제제의 생성에 중요하며, 규제 당국은 생물학적 제제를 시판하기 위해 Monoclonality의 근거를 요구합니다. 기존 접근법은 0일 차에 투과된 백색광을 사용하여 Well을 시각화하여 단일 세포의 유무를 확인하는 것과 관련됩니다. 그러나 세포 파편과 Well 아티팩트로 인해 세포로 쉽게 착각할 수 있으므로 이 접근법에 문제가 없는 것은 아닙니다. 결과적으로 Cell Line Developer들은 일반적으로 콜로니 상태에서 세포를 평가하며 콜로니의 기원을 추적하여 Monoclonality를 확인합니다.
이 실험과정은 객관적 이미지 분석에 기반한 Monoclonality 검증을 위해 CloneSelect Imager 시스템 과정을 강조합니다. Single Cell Sorting을 위한 DispenCell Single-Cell Dispenser와 결합되면 실험과정의 Clonal Outgrowth의 증가와 추가적인 이미지 기반 Monoclonality 보증이 모두 개선됩니다.
- 마이크로플레이트 Well에 Single Cell Sorting – Single Cell로 Viable Cell을 분리하고 클로닝합니다. 이를 통해 사용되는 세포의 Population이 유전적으로 동일하며 발현이 균일하게 이루어지도록 합니다.
- 0일차 및 그 이후 날짜의 플레이트 WL을 스캔 – 0일차 및 그 이후 날짜의 이미지 플레이트. Monoclonality를 문서화(치료 세포주의 규제 지표)하는 것은 일반적으로 단일 세포의 이미지를 기록하고 이를 규제 문서 파일에 포함하는 이미지 기반 작업입니다.
- 플레이트 스캔 검토 및 전체 Outgrowth(WL) 평가 – 세포 Growth Rate, Confluence 측정값, 콜로니 형성을 추적하는 이미지를 검토하고 분석합니다.
- Monoclonality를 확인하고 규제 제출을 위한 Well 데이터 내보내기 – 규제 제출을 위한 세부 보고서에서 Monoclonality를 확인하고 Well 데이터를 내보냅니다.
단일 세포 분주를 이용한 Clonal Outgrowth 개선
DispenCell의 단일 세포 분주기에는 세포의 통과를 감지하는 감지 팁이 장착되어 있습니다. 각 세포가 진행함에 따라 고유한 전기 신호가 촉발됩니다. 이 고유한 전기 추적은 즉시 기록되므로 사용자는 세포를 분주한 후 즉시 클론성 증거를 확인할 수 있습니다.
이 기술은 임피던스 기반이므로 세포에 매우 부드럽게 작용하여 최적의 Outgrowth를 위해 Viability와 무결성을 보존합니다. DispenCell은 멸균된 일회용 감지 팁(DispenTip)을 사용하여 DispenTip 구멍을 통해 흐르는 모든 세포의 통과를 감지하고 기록합니다. 단일 세포가 구멍을 통과하여 Well로 흘러 들어가면 고유한 피크로 나타나는 전기적 특성이 남는 반면, 더블릿 또는 다중 세포에서는 다중 피크가 발생합니다.
CSI-FL의 이미지 옆에 두 개의 Well Dispenser에서 생성된 피크 정보를 그림으로 표현. 단일 피크와 세포가 있는 것 하나(상단)와 이중 피크와 세포 2개가 있는 것 하나(하단). 단일 세포가 콜로니로 발달하고 CSI-FL의 Monoclonality 보고서 기능을 사용하여 Monoclonality 보고서가 생성되었습니다.
무엇이 Monoclonal이고 무엇이 아닌가
CloneSelect Imager 소프트웨어를 사용하여 개별 고정화 콜로니를 확대하면, 서로 다른 시점의 콜로니 이미지를 검토하여 생장을 추적하고 콜로니가 monoclonal인지 여부를 판단할 수 있습니다. 아래의 그림에는, 두 개의 콜로니의 이미지가 제시됩니다. 두 개의 콜로니의 생장을 관찰하고 0일 차까지 이미지를 추적하면, 콜로니가 하나 이상의 세포에서 유래되었는지 여부를 파악할 수 있습니다. Bead(Yellow 원으로 표시됨)를 반고형 배지에 첨가하면 위치 기준 역할을 하여 동일한 콜로니가 매회 Imaging되었는지 확인할 수 있습니다.
CloneMedia CHO Growth A 반고형 배지에서의 CHO의 Cell Growth CloneSelect 이미저는 다중 시점에 6 Well 플레이트의 이미지를 촬영하기 위해 사용되었습니다. 0일 차에, 위 열에 하나의 세포가 존재한다는 것이 명확하게 관찰되었고, 아래 열에 두 개의 세포가 관찰되었습니다. Yellow 원은 시간에 따라 동일한 콜로니가 Imaging되었는지 확인하기 위한 위치 기준으로 사용되는 Bead의 위치를 보여줍니다.
Monoclonality의 이미지 근거 제시하기(보고서)
Cell line development 과정에서 monoclonality 형성능의 근거를 이미지로 제시하는 것은 단일 세포의 이미지를 추출하는 것처럼 간단하지 않습니다. 예를 들어 전체 Well의 High-Resolution 이미지도 두 번째 세포가 존재하지 않는지 확인하기 위해 조사해야 합니다.
몇 번의 간단한 클릭만으로 CloneSelect™ Imager(CSI)의 Monoclonality 보고서 기능이 클론형성능을 확립하기 위한 근거 이미지를 쉽게 공유할 수 있는 보고서로 객관적으로 구성하며, 동일한 과정을 수동으로 할 때 일반적으로 필요한 연구자들의 시간을 절감해 줍니다.
Monoclonality 보증 방법
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