재조합 단백질 생산을 위한 Cell Line Development
재조합 단백질 제품의 수율을 높이기 위해 CHO, 하이브리도마 또는 HEK 293과 같은 세포주를 플랫폼으로 선택하는 것이 일반적입니다. 안정 세포주 개발 과정은 숙주세포(CHO 또는 HEK 293)를 재조합 플라스미드 또는 하이브리도마용 세포 Fusion으로 Transfection하는 것으로 시작됩니다. Transfection 또는 세포 Fusion 후, 대상 단백질(생물학적 치료제)의 발현을 기반으로 많은 수의 클론을 Screening하고 선별합니다. 후보 클론이 식별되면 DNA 염기서열분석과 다양한 다운스트림 분석 Assay를 사용하여 각 ‘유효물질’ 확인, Validation, 특성분석합니다. 작업이 완료되면, 생물공정이 발생할 수 있도록 선도물질 클론을 확장하고 규모를 증가시킵니다.
일반적인 Cell line development 과정의 단계
재조합 단백질 생산을 위한 실험과정
- Transfection - 숙주세포를 대상 단백질을 암호화하는 재조합 플라스미드로 Transfection합니다.
- Transfection된 세포의 풀 선택 - 안정적이며 대상 단백질을 생산하는 세포를 선택합니다.
- 클론 스크리닝 및 선택 - 대상 단백질의 높은 발현을 위해 클론을 스크리닝 및 선택합니다.
- 세포주 특성 분석 - 각 클론의 안정성과 생산성을 검증하고 그 특성을 분석합니다.
- 확장 및 정제 공정 평가 - 클론을 확장하고 정제를 위한 생물 공정을 수행합니다. 세포 은행 작업도 수행합니다.