세포 이미징: 획득 및 분석
연구자들은 온전한 세포를 보여주는 위상차 현미경부터 단일 분자나 세포소기관의 형광 이미징에 이르는 여러 가지 세포 이미징 방법을 사용할 수 있습니다. 세포 무결성, 세포독성, cell viability와 같은 세포의 현재 상태의 평가 및 측정을 위해 세포 분석을 수행하며, 여러 다른 연구 응용 분야에서도 사용됩니다. 세포 분석에는 데이터를 수집 및 분석하고, 이를 의미 있고 유용한 형식으로 내보내는 통합적인 과정이 포함됩니다.
세포 분석 워크플로
세포 배양, 플레이팅, 유지를 위한 프로토콜은 세포 모델에 따라 다르나, 아래에서는 세포 기반 이미징 assay를 위해 high-content imaging 시스템과 세포 분석 소프트웨어를 이용한 업스트림 배지 준비에서부터 다운스트림 실험 분석을 포함하는 전반적인 실험과정 단계를 개괄합니다.
- 세포 플레이팅을 위해 다양한 실험기구(챔버 슬라이드, 디쉬, Microplate)를 이용합니다.
- 세포 처리가 assay 워크플로의 일부인 경우, 원하는 화합물을 이용하여 세포를 처리합니다.
- 표지자 염색이 필요한 경우, 원하는 형광단(형광 염료, 형광 단백질-펩타이드 융합 등)을 이용하여 세포를 표지합니다.
- 세포 이미지 획득을 위해서는 플레이트를 세포 Imaging 시스템에 놓고 Live Cell 이미지 획득을 시작합니다.
- 세포 이미지 분석 - 세포 이미징 분석 소프트웨어를 사용하여 Live Cell 이미지의 정량적 분석을 실행합니다.
High-content 및 자동 이미징으로 스크리닝 가속화
이 기술 웨비나는 바이러스 연구, Neurite Outgrowth 연구, 오가노이드 모델과 같이 High-Content Screening 응용 분야에 중점을 둡니다. 제공된 정보는 현재 세포 기반 Assay와 Live-Cell Imaging 작업을 하고 있거나 현행 Imaging 실험과정을 자동화 및/또는 규모 증가를 원하는 연구자들에게 적용됩니다.
세포 이미징 방법의 유형
High-content 및 high-throughput 또는 사용이 간편한 시스템이 필요한 경우, 당사의 세포 이미징 솔루션을 이용하면 스크리닝 또는 연구 실험실의 요구에 적합한 방식으로 이미지를 획득 및 분석할 수 있습니다. 여기에서는 여러 가지 세포 이미징 방법을 간략히 설명해 보겠습니다.
- 위상차 현미경은 온전한 세포를 보여줍니다.
- 형광 이미징은 단일 분자나 세포소기관을 보여줄 수 있습니다.
- Brightfield 현미경은 전체 세포를 빠르게 시각화하는 데 유용합니다.
- 공초점 현미경은 고품질 이미지와 세포의 3D 재구성에 선호됩니다.
- 4D live cell imaging은 Timelapse 현미경과 공초점 현미경의 결합입니다.
- 자동화 현미경은 전체 시야에서 로버스트한 초점값을 가지도록 하는 소프트웨어와 하드웨어를 활용하며, 반복 가능하며 주관적인 정량적 데이터를 생성하는 정교한 이미지 분석 소프트웨어도 함께 사용합니다.
일반적인 세포 기반 assay와 응용 분야
여기에서는 3D cell culture부터 줄기세포 연구에 이르는 여러 Cell Based Assay의 주제와 함께 심근세포 및 독성 스크리닝에 대한 적용과 관련된 내용을 중점적으로 다루어 보았습니다.
최신 자료
Cell Imaging과 분석 실험과정
Cell Imaging과 분석 실험과정
세포 플레이팅
부착 또는 현탁 세포를 배양 접시, 챔버 슬라이드, Microplate를 포함한 Labware에 플레이팅 합니다. 정상 배양 조건(즉, 37°C, 5% CO2)에서의 세포 배양. 부착 세포의 경우, 플레이팅 된 세포를 하룻밤 동안 배양하면 세포의 부착 및 생장을 위한 충분한 시간을 확보할 수 있습니다.
96웰 또는 384웰 플레이트
High-content, high-throughput screening을 위한 대부분의 세포 배양은 96 또는 384 well Microplate를 이용하여 수행합니다.
화합물 처리
프로토콜에서 필수적인 경우, 대상 화합물로 세포를 처리합니다.
화합물의 작용 기전과 조사 중인 생물학적 반응에 따라 몇 분에서 몇 일 동안 세포에 화합물을 첨가할 수 있습니다. 예를 들어, 세포사멸 또는 수용체 내재화 assay는 일반적으로 더 짧은 배양 기간이 필요한 반면, 다중 파라미터 세포독성 assay에는 더 긴 기간이 필요합니다. 더 긴 시간의 화합물 처리에서는 배양 도중 화합물을 교체할 필요가 있을 수 있습니다.
표지자 염색
Live Cell는 다양한 형광단으로 염색되거나 형광 단백질-펩타이드 융합을 포함한 구조체로 transfection/형질 도입될 수 있습니다. 염색 시 제조업체의 지침을 따라야 합니다. 모든 Live Cell의 응용 분야에 염색이 필요한 것은 아니며, Label Free Imaging 및 분석에서는 Brightfield에서만 세포를 추적 및 모니터링할 수 있습니다.
분석 시약(assay kit)
생명과학 연구, 신약 개발, 개발, Bioassay에 이용하기 쉬운 확실한 Assay 키트. 이 assay 키트는 당사의 기기와 사용하도록 최적화되어 있습니다. 신약 개발 초기에 더 많은 화합물을 스크리닝하고 시험 화합물의 전체 농도-반응 프로파일을 특성화합니다.
ImageXpress High-content Imaging 포트폴리오
High-Content Imaging 및 분석을 위한 우리의 시스템은 유연한 확장성을 제공하여 연구에 따라 시스템을 쉽게 변경할 수 있도록 합니다. 목표, 필터, 이미징 모드, 환경 통제를 포함한 특정 연구에서의 요구 사항을 해결하는 옵션과 모듈이 있습니다.
생세포 이미지 획득
연속 Timelapse 획득 시, 시간 시리즈의 총 시간 길이와 이미징 간격을 설정합니다(즉, 24시간마다 이미징).
불연속 타임랩스 획득은 플레이트를 배양기로 옮기거나 꺼낼 때 수행할 수 있으며, 서로 다른 시점에 이미징할 수 있습니다.
세포 이미지 분석
세포 이미징 분석 소프트웨어로 이미지를 분석하여 연구 중인 생물학적 반응에 대한 다중 Parameter 판독값을 생성합니다. 타임랩스를 획득하여 운동 데이터를 생성하고 검토할 수 있습니다.
https://share.vidyard.com/watch/ABJi1T62w9u2H6GTC59Uxx
세포 이미징 획득 및 분석 소프트웨어
MetaXpress® High-Content Image 획득 및 분석 소프트웨어는 긴밀하게 조정 및 통합된 워크플로를 특징으로 하는 high-content analysis용 포괄적인 솔루션입니다. 응용 분야 모듈 포트폴리오는 사용 편의성부터 독점적인 assay 설계에 이르기까지 다양한 요구 사항을 지원합니다. 소프트웨어에는 Timelapse 분석과 같은 2D 및 3D Imaging을 위한 강력하고 멋진 도구가 포함됩니다. 당사의 이미징 획득 설정 마법사의 도움으로, 몇 분 만에 데이터를 생성할 수 있습니다.