Rat aortic endothelial cells 은 Cell-cell Adhesion, Migration, Angiogenesis 뿐 아니라 정상세포와 질병이 있는 세포의 Endothelial Function 에 관련된 Cellular Signaling Pathway 등 다양한 과학적 연구를 위해 사용이 되어왔습니다. 다만 이 세포는 Primary Cell 이므로 신약 후보물질 스크리닝에 사용하기는 어려울 수 있습니다. Assay를 성공적으로 수행하기 위해서는 assay 전 live cell imaging과 Cell Confluence를 측정하는 것이 중요합니다.
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그림 1. Rat aortic endothelial cells 의 Transmitted light image
Single Primary Culture 에서 Cell Process 와 Cell Morphology 를 보여줍니다.
그림 2. Rat aortic endothelial cells 에서의 StainFree counting
SpectraMax i3 Minimax 300 Imaging Cytometer 를 사용하여 Rat Aortic Endothelial Cell 를 이미징하였으며, 맞춤형 분석 설정을 이용하여 세포를 확인하였습니다. 좌측이미지는 Transmitted Light 에서 촬영한 사진 원본이며,(상단: 고밀도 배양, 하단: 저밀도 배양)이며, 오른쪽은 동일한 이미지에서 Software가 식별한 세포의 영역을 보라색 마스크로 나타낸 것입니다.
Images는 콜롬비아의 미주리 대학교 Dr. Virginia Huxley 와 우리의 Field Application Scientist 인 Randy Milano 에 의해서 제공되었습니다.
Tip:
Rat Aortic Endothelial Cell 은 매우 편평하고, 서로 다른 형태가 다중으로 나타나는 데다가, 때로는 그림 1과 같이 신경세포 증식물을 연상시키도록 길게 자라나는 모양으로 인해 이미징 기반의 세포분석이 어려울 수 있습니다. StainFree Technology 는 여기에 Machine Learning 알고리즘을 적용하여 편의성을 높였습니다. 이미지 분석 설정에서 '새 설정 만들기' 옵션을 선택하고 세포 중심에 초점을 맞추어 그리기 기능을 사용하면, 세포 돌기(증식물)를 무시할 수 있습니다. 대표로 서로 다른 형태를 가진 일부 세포의 모양이 포함되도록 하면, 그림 2과 같은 결과를 얻을 수 있습니다.
Helpful hint: 초점을 맞출 때, Negative Value 쪽으로 더 조정하게 될 경우, 보다 뚜렷한 세포 이미지를 얻을 수 있어 소프트웨어를 이용한 Counting 이 더 쉬워집니다.
Rat Aortic Endothelial Cells 분석을 위한 장비와 시약
- SpectraMax® i3 Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro 소프트웨어
장비 설정 보기
| Parameter | 세포 계수를 위한 설정 |
| Optical configuration | SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer |
| Read mode | Imaging |
| Read type | Endpoint |
| Wavelength settings | Transmitted light |
| 플레이트 유형 | 96-well Costar black/clear bottom |
| Image acquisition settings | Exposure: 7ms Focus adjustment: -455 µm (may be optimized based on characteristics of the cells used) |
| Image analysis settings | Analysis type: Discrete Object Analysis Wavelength for finding objects: TL |
| Find objects | Settings: Create new setting (see tips above) |
StainFree 염색 없는 Cell Detection 기술에 관하여
Imaging 을 기반으로 한 Cell-Based Assay 는 일반적으로 형광물질을 세포에 붙여야 하는데, 이는 살아있는 세포에 독성이 될수도 있고, 혹은 고정된 세포를 사용하여 염색을 해야하기도 합니다. Cell Counting, Cell Confluence 를 분석하는 경우, StainFree 기법을 이용하면, Cell Viability 에 영향을 주지 않고 Cell Growth 와 Cell Viability 를 정량적으로 Monitoring 할 수 있습니다.
MiniMax 300 Imaging Cytometer 가 장착된 SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate 플랫폼에서 특허 출원 중인 유일무이한 기술, StainFree Cell Detection 기술을 이용할 수 있습니다. DNA에 삽입되는 DAPI나 장기적으로 세포에 독성이 되기도 하는 Live Cell Dye 등으로 세포를 염색하지 않고, Cell Growth, Cell Viability 와 같은 다양한 분석을 수행할 수 있게 합니다.