섬유육종 세포주 HT1080은 1972년에 종양 생검 조직으로부터 유래하였습니다. 흥미롭게도 이 환자는 방사선 또는 항암화학 요법 치료를 받지 않은 상태였으므로, 이러한 치료로 인해 일반적으로 발생하는 원치 않는 Mutation 이 세포에 나타나지 않았습니다. HT1080 세포는 invasive 하기 때문에, 세포 침윤 및 Migration을 위한 모델로 사용되는 경우가 많습니다. 연구자들은 다양한 항암제 후보군이 HT1080 세포의 침윤을 억제할수 있는지를 식별할 수 있었습니다.
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그림 1: 세포의 Migration 이미징
Platypus Technologies의 Oris™ Pro Cell Migration Assay는 Cytochalasin D(좌측) 또는 DMSO대조군(우측)으로 처리한 HT1080 세포의 Migration의 측정에 사용되었습니다. 이 분석법은 Biocompatible Gel (BCG)을 사용하여 세포배양에서 세포가 없는 공간 형성합니다. 세포를 96well Plate 에 Seeding 후에는 BCG가 용해되어 세포가 웰 중심(황색 원으로 나타낸 영역)으로 migration 할 수 있도록 합니다. SpectraMax Minimax 300 Imaging cytometer 로 결과를 이미지화하였으며, 웰 중심에서 migration한 세포는 SoftMax Pro 소프트웨어의 대상 영역(ROI) 선택 기능을 사용하여 계수하였습니다.
그림 2: StainFree 세포 계수
SpectraMax Minimax 300 이미징 세포분석기를 사용하여 HT1080 세포를 이미징하였으며, 사전 정의한 분석 설정인 ‘CellsD’를 이용하여 세포를 식별하였습니다. 좌측에 보이는 것은 Transmitted Light 이미지이며, 우측은 동일한 이미지를 소프트웨어가 식별한 세포를 보라색 마스크로 나타낸 것입니다.
그림 3: 세포의 Migration 정량화
세포는 Cytochalasin D로 처리되었으며, 이후 Well 중심으로 migration된 세포는 StainFree 기술(청색 원) 또는 형광 세포 분석(녹색 원)을 이용하여 계수하였습니다. Cytochalasin D에 대한 EC50 값은 각각 0.13µM 및0.15 µM로, Oris Pro Assay을 이용해 세포의 Migration을 정확하게 평가하기 위해 세포를 염색할 필요가 없음을 확인해 줍니다.
HT1080 세포 분석 툴킷
- SpectraMax® i3 Multi-Mode Microplate Detection Platform
- SpectraMax® MiniMax™ 300 Imaging Cytometer
- SoftMax® Pro 소프트웨어
장비 설정 보기
| Parameter | 세포 계수를 위한 설정 | |
| Optical configuration | SpectraMax MiniMax 300 Imaging Cytometer |
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| Read mode | Imaging | |
| Read type | Endpoint | |
| Wavelength settings | Transmitted light | |
| Image acquisition settings | Exposure: 7ms 또는 8ms | |
| Image analysis settings | Analysis type: Discrete Object Analysis Wavelength for finding objects: TL |
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| Find objects | Setting: CellsA | |
StainFree 염색 없는 Cell Detection 기술에 관하여
Imaging 을 기반으로 한 Cell-Based Assay 는 일반적으로 형광물질을 세포에 붙여야 하는데, 이는 살아있는 세포에 독성이 될수도 있고, 혹은 고정된 세포를 사용하여 염색을 해야하기도 합니다. Cell Counting, Cell Confluence 를 분석하는 경우, StainFree 기법을 이용하면, Cell Viability 에 영향을 주지 않고 Cell Growth 와 Cell Viability 를 정량적으로 Monitoring 할 수 있습니다.
MiniMax 300 Imaging Cytometer 가 장착된 SpectraMax i3 Multi-Mode Microplate 플랫폼에서 특허 출원 중인 유일무이한 기술, StainFree Cell Detection 기술을 이용할 수 있습니다. DNA에 삽입되는 DAPI나 장기적으로 세포에 독성이 되기도 하는 Live Cell Dye 등으로 세포를 염색하지 않고, Cell Growth, Cell Viability 와 같은 다양한 분석을 수행할 수 있게 합니다.